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酵母雙雜交技術不僅應用于哺乳動物蛋白質之間的相互作用研究,還可以用來研究高等植物蛋白質之間的相互作用。其基本原理是酵母的轉錄激活因子GAL4由兩個可以分開的、功能上相互獨立的結構域(domain)組成,N端有一個由147個氨基酸組成的DNA結合域(DNA binding domain,BD),C端有一個由113個氨基酸組成的轉錄激活域(transcription activation domain,AD)。BD可以和上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)結合,而AD則能激活UAS下游的基因進行轉錄。但是,單獨的BD或AD不能激活基因轉錄,它們之間只有通過某種方式結合在一起才具有完整的轉錄激活因子的功能。酵母雙雜交系統主要利用酵母的GAL4的這個特性通過兩個雜交蛋白在酵母細胞中的相互結合及對報告基因的轉錄激活來研究活細胞內蛋白質的相互作用。
服務內容
?酵母雙雜cDNA文庫構建
?誘餌載體構建
?轉化酵母細胞
?誘餌質粒酵母細胞的毒性檢測
?誘餌蛋白的自激活驗證
?驗證誘餌蛋白與靶蛋白的互作
?文庫篩選測序
?陽性克隆回復雜交驗證
?提供完整的實驗圖片以及報告單,文庫質粒
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