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酵母單雜交技術是新近發展起來的一種體外研究DNA與蛋白質相互作用的技術。主要用途有①確定已知DNA—蛋白質之間是否存在相互作用;②分離結合于目的順式調控元件或其他短DNA結合位點蛋白的新基因;③定位已經證實的具有相互作用的DNA結合蛋白的DNA結合結構域,以及準確定位與DNA結合的核苷酸序列。許多真核生物的轉錄激活子由物理和功能上獨立的DNA結合區(DNA-binding domain BD)和轉錄激活區(Activation domain AD)組成,因此可構建各種基因與AD的融合表達載體,在酵母中表達為融合蛋白時,根據報道基因的表達情況,便能篩選出與靶元件有特異結合區域的蛋白。轉錄因子與順式元件結合,激活最基本啟動子,使得報告基因表達,若連接如3個以上順式作用元件,可增強轉錄因子的識別和結合效率。
服務內容
? 酵母單雜載體構建
? 篩選順式元件對AbA的抗性
? 驗證順式元件與轉錄因子的結合
? 酵母單雜文庫構建
? 酵母單雜文庫篩選并測序分析
? 陽性克隆驗證
? 提供完整的實驗圖片以及報告單
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